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基孔肯雅熱IgG檢測試劑盒（酶聯免疫法）

【產品名稱】

通用名稱：基孔肯雅熱IgG檢測試劑盒（酶聯免疫法）

英文名稱：Chikungunya IgG micro-capture ELISA

【產品規格】

96T

【預期用途】

試劑盒可用于人血清和血漿（檸檬酸鹽）中基孔肯雅熱IgG抗體的定性檢測。

【檢測原理】

試劑盒采用酶聯免疫法。微孔中預包被有抗人IgG，用于結合樣品中相應的抗體。洗板后，去除非結合的樣品。再加入基孔肯雅熱抗原液，再次洗板后，再加入生物素化的基孔肯雅熱抗體。加入鏈霉親和素標記結合物（酶聯物），與固相的特異性的基孔肯雅熱復合物結合。加入TMB底物液后，微孔中顯藍色。顯色的強度與病人樣品中基孔肯雅熱IgG抗體的量成正比。加入終止液終止酶反應，形成黃色終點產物。后在酶標儀處450 nm讀數。

【檢測方法】

試劑準備

試驗前，將所有試劑，樣品，質控品平衡至室溫(20~25℃)

基孔肯雅熱抗原：

每瓶加入1mL稀釋洗滌液溶解，緩慢加入，室溫下靜置溫育15min，制成即用型抗原液。此抗原液在2~8 ℃可穩定保存1天。

洗滌液：

1個單位的濃縮洗滌液+19個單位的雙蒸水。

如：10mL濃縮洗滌液+190 mL雙蒸水。稀釋洗滌液在室溫下能穩定保存5天。開瓶后，濃縮的洗滌液在2~8℃可穩定保存至有效期.

檢測步驟

試驗前，仔細閱讀說明書。嚴格執行說明書要求才能得到優質結果。如試驗使用自動洗板機，建議每孔350µL，洗板5次（如手工洗，則每孔300µL，洗板3次）。試驗前，確定好樣品，質控品的加樣布局方案。取所需板條置于板架上。

至少設

1孔（如A1）         空白對照

1孔 (如B1)          陰性質控

2孔 (如C1+D1）      臨界質控

1孔（如E1）         陽性質控

如覺得有必要，建議樣品和質控品都作雙份檢測。

試驗應按同樣的加樣順序加取試劑，避免不同的時間間隔造成誤差。

使用新的一次性加樣槍頭，加各質控品，樣品

調節恒溫箱為37±1℃

• 加50µL質控品和稀釋樣品至相應各孔中，設A1作為空白對照
• 封板紙蓋板
• 37 ± 1 ℃溫育1小時±5分鐘
• 溫育后，移除封板紙，倒出微孔內液體，每孔用300µL稀釋洗滌液，洗板3次，避免洗滌液相互溢濺至其它微孔。每次洗板時，浸泡時間應大于5秒。后，在吸水紙上拍干，去除殘留液滴。

注意：洗滌步驟很關鍵。不充分的洗板，會導致不精確或錯誤上升的吸光度值。

• 除空白對照孔（A1）外，加50µL基孔肯雅熱液抗原液至各孔，蓋板
• 室溫下溫育30分鐘
• 重復步驟4
• 除空白對照孔（A1）外，加50µL 基孔肯雅熱液抗體液至各孔，蓋板
• 室溫下溫育30分鐘
• 重復步驟4
• 除空白對照孔（A1）外，各加50µL鏈酶親和素酶聯物至各孔，蓋板
• 室溫下溫育30分鐘
• 重復步驟4
• 加100 µL TMB底物液至各孔中
• 黑暗處，精確溫育15分鐘
• 按加TMB底物液的順序和速度，加100 µL終止液至各孔中。

藍色溶液在孵育過程中變為黃色。

注意：強陽性樣品會導致色原產生沉淀，沉淀的產生會對讀數產生影響。所以先用陰性基質進行預稀釋，建議1：1的比例稀釋，然后，再1個單位的預稀釋樣品+100個單位的樣品稀釋液。終結果（以U計算）乘以預稀釋因子2即可

• 加入終止液后，30分鐘內，在酶標儀450/620 nm處讀數

【結果計算】

用A1空白對照孔對酶標儀進行調零

如遇技術問題，酶標儀不能調零。 所測樣品的吸光度值減去空白對照的讀數值，

即可得到可靠的讀數。

在酶標儀處450 nm處測讀所有質控品和樣品的吸光度值。620 nm作為參考波長。

如進行雙孔檢測，計算吸光度均值。

實驗有效性標準

如試驗有效，必須滿足以下要求

·空白對照（A1）：       吸光度值<  0.100

·陰性質控（B1）：       吸光度值<  臨界讀數

·臨界質控（C1+D1）     吸光度值   0.150~1.300

·陽性質控（E1）        吸光度值>  臨界讀數

如上述標準沒滿足，試驗視為無效，試驗應重測。

結果計算

臨界讀數是雙孔臨界質控的吸光度均值

示范： 臨界吸光度值0.39 +臨界吸光度值0.37＝0.76 / 2 = 0.38

即吸光度值＝0.38

德國IBL基孔肯雅熱IgG檢測試劑（酶聯法)